標簽抗體,能夠高度特異性識別通過重組技術構建的融合蛋白上特殊表位的抗體。

                隨著生物技術的發展,科研人員可以通過DNA重組技術,構建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白,進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化,以達到研究的需求。

                主要類別

                Flag抗體-抗Flag標簽抗體

                融合標簽,如Flag、GST等標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白。

                Flag標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于各種細胞類型,包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等,相應的Flag標簽抗體也被廣泛應用。由于Flag標簽系統的純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標簽可以通過加入腸激酶處理去除,腸激酶專一識別該肽序列C末端的5個氨基酸殘基。

                Flag抗體可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白等。

                His抗體-抗His標簽抗體

                融合標簽根據其相對分子質量大小可以分為兩大類:大的蛋白質分子和小的多肽片段。融合標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。

                His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白質的吸附純化。由于分子量較小,并且較容易分離和純化,His融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優勢,是目前用于純化的融合標簽中使用較為廣泛的一種。利用 His標簽可以建立一個基于融合蛋白的高效檢測和純化系統。

                His抗體可以用于檢測和His標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。

                GST抗體-抗GST標簽抗體

                隨著越來越多的新基因的發現,基因融合蛋白表達體系以其在新發現蛋白研究中的顯著優勢已得到廣泛應用。其中GST標簽體系具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解,從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個非常好的強免疫原,因此,很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統至今仍被廣泛應用。

                近年來在原核表達體系中,谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍。用GST融合表達系統表達外源基因時,對融合表達產物的檢測和純化非常重要,這里面就包括了GST標簽抗體的應用。

                GFP抗體-抗GFP標簽抗體

                常用的標簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein),簡稱GFP,這種蛋白質是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質,在藍色波長范圍的光線激發下,會發出綠色螢光。

                GFP或其突變體EGFP等被廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分布。一般來說,GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當的突變體,也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。

                GFP標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于各種細胞類型,包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等,相應的GFP標簽抗體也被廣泛應用。

                Myc抗體-抗Myc標簽抗體

                隨著蛋白質組學的迅猛發展,重組蛋白質的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標簽如GST、Myc、His等,可用于輔助目標蛋白的純化,這已經被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。在1985年開發出鼠抗c-myc標簽抗體并被作為免疫化學試劑用于細胞生物學和蛋白質工程領域中。Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。

                Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標簽抗體到二乙烯砜活化的瓊脂糖上而進行親和純化。Myc標簽可放在C端或N端,但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力,因此Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。

                HA抗體-抗HA標簽抗體

                融合標簽,如HA、His等標簽的使用可以簡化蛋白質的純化過程、控制蛋白質固定的空間取向及方便檢測、使體內生物事件可視化、提高重組蛋白質的產量、增強重組蛋白質的可溶性和穩定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標簽系統利用一個HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。

                HA標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于多種細胞類型,相應的HA標簽抗體也被廣泛應用。HA標簽抗體能特異識別C末端或N末端帶有HA標簽(HA-tagged)的融合蛋白。


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